大鼠肺泡上皮细胞L2培养指导手册

一、细胞培养条件

尊龙凯时提供的大鼠肺泡上皮细胞L2具有良好的生长特性，以下是细胞培养的具体条件：

• 细胞名称：大鼠肺泡上皮细胞L2
• 生长特性：贴壁生长
• 冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
• 培养体系：1640 + 10% FBS + 1% 双抗
• 传代方法：第一次建议采用1:2传代，2天后更换培养基。

注：请采用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如果效果不理想，建议直接使用尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，将其培养至良好状态，填满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。在此过程中，应使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作，随后将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。

显微镜观察细胞生长情况，并记录不同倍数的图像（推荐40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片的情况下默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞汇合度超过80%，请按以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，并在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态后迅速加5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加5ml完全培养基终止消化。
3. 把悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
4. 弃去上清后，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管并直接置于-80℃冰箱中。

c. 细胞复苏

1. 取出冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，待管内无结晶后用75%酒精消毒管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能会发生脱落，这是正常情况。可将培养液收集至离心管，并按上述方法进行细胞重悬和培养。

五、售后条款

尊龙凯时对细胞质量高度重视。出现问题时，以下情况可重发：

• 运输过程中的细胞丢失或破损。
• 收到产品后48小时内，发现的细胞污染问题。
• 细胞复苏后存活率低于预期，需提供照片以验证。
• 在特定情况下，提供详细操作步骤和照片可获得重新发送的服务。

反之，因客户操作不当或不当处理造成的问题，将不予以重发。