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细胞培养指南:尊龙凯时GM-CSF与IL-4诱导小鼠BMDCs的操作步骤及常见问题解答

发布时间:2025-02-15   信息来源:吕蓝育

树突状细胞(Dendritic cells, DCs)在天然识别病原体及其后续的适应性免疫反应活化中发挥着至关重要的作用。虽然DCs遍布于多种体内组织中,但其数量相对较少,难以满足科学研究和临床治疗的需求。因此,研究人员积极探索各种方法以体外培养和扩增DC。对于小鼠而言,最常用的办法是诱导骨髓细胞生成骨髓来源的树突状细胞(Bone Marrow-Derived Dendritic Cells, BMDCs),这一过程需要在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)等系列细胞因子的作用下进行。

细胞培养指南:尊龙凯时GM-CSF与IL-4诱导小鼠BMDCs的操作步骤及常见问题解答

BMDCs作为研究免疫反应、抗原呈递及细胞免疫调控的重要工具,受到广泛关注。近期,上海交通大学药学院的沈琦研究团队在知名学术期刊《Advanced Functional Materials》上发表了题为“Self-adjuvanting bacteria hydrogel for SHP1 checkpoint inhibition in tumor-draining lymph nodes to enhance cancer immunotherapy”的研究成果。该团队设计的AAM水凝胶系统通过增强DCs的免疫活性,旨在提升肿瘤免疫治疗的效果。在BMDCs的诱导过程中,作者应用了重组小鼠GM-CSF和小鼠IL-4。研究结果表明,MHV能够通过甘露糖受体特异性靶向BMDCs,并通过温和的光热效应诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡(ICD),从而释放肿瘤抗原并激活BMDCs。

此外,苏州大学FUNSOM的陈倩团队在《Advanced Materials》上发表了题为“AMinimalist Pathogen-Like Sugar Nanovaccine for Enhanced Cancer Immunotherapy”的研究论文。在这项研究中,作者同样使用重组小鼠GM-CSF和IL-4诱导骨髓来源细胞的分化,为疫苗的免疫激活、免疫通路及抗原特异性T细胞的增殖情况提供了体外验证。

在诱导BMDCs的过程中,需要使用一系列实验器材和试剂,例如:6-8周龄的C57BL/6小鼠、解剖用剪刀和钳子、磷酸盐缓冲液(PBS)、离心管、培养基RPMI1640等。通过精确的实验步骤,可以高效地提取和培养BMDCs。

在此过程中,研究人员会遇到诸多挑战,例如如何判断树突状细胞是否成熟、如何提高BMDCs的诱导效率、以及如何保证细胞因子的稳定性等问题。为了确保细胞的成熟,成熟的树突状细胞通常会表达CD11c、MHC-II和CD86等标志物,可以通过流式细胞术检测确认;而提升诱导效率则需优化细胞密度以及细胞因子的浓度(小鼠GM-CSF一般为20-40ng/mL,IL-4为10-20ng/mL)。

针对细胞存活率低的问题,需确保培养环境的适宜性并使用新鲜分装的细胞因子。若诱导过程中细胞生长缓慢或分化不完全,也可考虑延长诱导时间。

总之,BMDCs的有效诱导对于生物医学领域尤其是肿瘤免疫治疗具有重大意义,而尊龙凯时的产品则可为相关研究提供支持,助力免疫疗法的发展。